丹酚酸B 调节SIRT1 信号途径抑制H2O2 诱导的NLRP3 炎症 小体激活

目的基于沉默信息调节因子1（SIRT1）/ NOD 样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体途径探讨丹酚酸B（SalB） 抗氧化应激致细胞损伤的作用机制,以期阐明丹酚酸B 抗心肌缺血的作用机制。方法采用体外构建H2O2 诱 导的氧化应激细胞模型,将H9c2 细胞分为6 组,分别为正常组、模型组（600 μmol·L-1 H2O2 刺激）、H2O2+丹酚 酸B（5、10、20 μmol·L-1）组和H2O2 + 丹酚酸B（20 μmol·L-1）+EX527（10 μmol·L-1） 组。采用MTT 法测定细胞 活性;Hoechst 染色法测定细胞凋亡;比色法及ELISA 法分别测定乳酸脱氢酶（LDH）、白细胞介素（IL）-1β 水 平;采用DCFH-DA 荧光探针检测细胞内活性氧（ROS） 水平;采用JC-1 荧光探针测定线粒体膜电位; Western Blot 法测定H9c2 细胞中NLRP3、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1（Caspase-1）、凋亡相关斑点样蛋白 （ASC）,以及SIRT1 信号通路相关的SIRT1、磷酸化AMP 蛋白活化激酶α（p-AMPKα）、AMP 蛋白活化激酶α （AMPKα）、过氧化物酶体增殖物激活受体γ共激活因子1α（PGC-1α） 蛋白表达。结果与正常组比较,模型 组细胞活力及线粒体膜电位明显降低（P＜0.01）,细胞凋亡程度及细胞内ROS、LDH 和炎症因子IL-1β 水平明 显升高（P＜0.01）;与NLRP3 炎症小体相关的NLRP3、Caspase-1 和ASC 蛋白表达显著上调（P＜0.01）, SIRT1、p-AMPKα/AMPKα 和PGC-1α 蛋白表达明显下调（P＜0.01）。与模型组比较,丹酚酸B 组的细胞活力 以及线粒体膜电位显著升高（P＜0.05,P＜0.01）,细胞凋亡程度及细胞内ROS、LDH 及炎症因子IL-1β 释放水 平明显降低（P＜0.01）。丹酚酸B 能够明显上调SIRT1 信号通路中SIRT1、p-AMPKα/AMPKα、PGC-1α 蛋白表 达（P＜0.05,P＜0.01）,下调NLRP3 炎症小体相关的NLRP3、Caspase-1 和ASC 蛋白表达（P＜0.05,P＜ 0.01）,且呈一定量效关系。在应用SIRT1 特异性抑制剂EX527 干预后,丹酚酸B 抑制H2O2 诱导的NLRP3 炎 症小体激活作用被明显逆转。结论丹酚酸B 可能通过激活SIRT1/AMPK/PGC-1α 信号通路,抑制氧化应激诱 导的NLRP3 炎症小体的激活,继而发挥抗心肌缺血作用。     

基于血管新生探讨活血化瘀中药对肿瘤转移的影响＊

血瘀贯穿肿瘤发生发展的始终，而血瘀所致缺血缺氧状态是肿瘤血管新生发生的始动因素，对肿瘤发生远端转移起着至关重要的作用。活血化瘀是中医治疗肿瘤的重要法则。但关于活血化瘀中药对肿瘤转移是促进还是抑制，长期以来存在争议，引起临床医生的极大困惑，亟待解决。考虑到血瘀所致血管新生异常在肿瘤血行转移中的作用，课题组以血管新生为切入点，探讨活血化瘀中药对肿瘤转移的影响，为临床提供重要参考。     

滋肾通络方干预小鼠Th17细胞分化和活性的作用研究

目的观察滋肾通络方(ZTF)对小鼠Th17细胞分化和活性的干预作用,探讨其抗类风湿关节炎的可能机制。方法制备ZTF冻干粉及含药血清,磁珠分选法提取C57BL/6小鼠脾细胞中的CD4~+T细胞进行体外培养,采用CCK-8法筛选ZTF冻干粉及含药血清对CD4~+T细胞活力影响的最佳浓度;另取体外培养的CD4~+T细胞,随机分为空白对照组、ZTF冻干粉0.5、1、2 mg/mL组、普通大鼠血清对照组、ZTF含药血清5%、10%、15%浓度组。ELISA法检测细胞上清IL-17含量;q-PCR检测IL-17、维甲酸相关核孤儿受体γt(ROR-γt)mRNA表达水平。结果与对照组比较,ZTF冻干粉各剂量组和含药血清10%、15%浓度组细胞上清IL-17水平降低(P0.05),ZTF冻干粉2 mg/mL组及含药血清各浓度组IL-17 mRNA水平降低(P0.05),同时ZTF冻干粉1、2 mg/mL组及含药血清不同浓度组细胞ROR-γt mRNA水平降低(P0.05)。结论 ZTF冻干粉及其含药血清均可抑制Th17细胞的分化和活性,提示其活性成分具有对Th17细胞的直接干预作用,这可能是其防治类风湿关节炎的机制之一。